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                      我院江凌老师在美国化学会期刊《ACS Catalysis》发表细胞内外串联催化方法制备海藻糖新技术
                      • 阅读次数:
                      • 发布时间:2018-03-20

                       


                      生物酶催化在工业合成复杂的化学物质领域有着广泛的应用yabo体育客户端下载。目前,具有催化活性的酶主要是通过提纯或者在全细胞内表达yabo体育客户端下载,但是这两种方法都具有一定的缺陷yabo体育客户端下载,提纯的酶应用成本较高yabo体育客户端下载yabo体育客户端下载yabo体育客户端下载,稳定性较差yabo体育客户端下载,难以进行循环利用; 而全细胞表达的酶则由于胞内外物质交换速率的限制,导致其催化效率较低。为解决这些问题,该研究提出将第一种酶固定在胞外的生物被膜上yabo体育客户端下载yabo体育客户端下载,同时在同一个细胞内表达另一种蛋白酶yabo体育客户端下载,将两种酶结合形成一个酶联反应体系yabo体育客户端下载yabo体育客户端下载。这一体系拥有较高的稳定性yabo体育客户端下载yabo体育客户端下载,可循环性以及可循环再生等优点yabo体育客户端下载yabo体育客户端下载yabo体育客户端下载??梢栽谝欢ǔ潭壬厦植勾车牧街置复呋从Φ娜钡銀abo体育客户端下载。

                      该工作利用CsgA基因编码淀粉样蛋白并能被分泌到大肠杆菌细胞表面形成生物被膜纳米纤维的特点yabo体育客户端下载,建立了以大肠杆菌为底盘微生物yabo体育客户端下载yabo体育客户端下载、基于多基因共表达和体外膟abo体育客户端下载yabo体育客户端下载?榛嘟岷系募际鮵abo体育客户端下载yabo体育客户端下载,并基于该技术实现了细胞内外串联催化方法制备海藻糖关键技术yabo体育客户端下载yabo体育客户端下载。具体来说yabo体育客户端下载,该研究首先借助重叠延伸PCR手段将多肽标签SpyTag连接在CsgA基因的碳端进行融合,并在各基因前端组装SD序列yabo体育客户端下载yabo体育客户端下载,再通过启动子和RBS等调控元件实现与海藻糖合成酶TreS的共表达yabo体育客户端下载;其次利用重叠延伸PCR手段将多肽标签SpyCatcher连接在β-淀粉酶基因碳端进行融合组装获得重组质粒,构建产重组淀粉酶的菌株yabo体育客户端下载。利用多肽标签SpyTag-SpyCatcher特异性共价结合的特性精准化固定重组β-淀粉酶在生物被膜上yabo体育客户端下载,并进一步将全细胞催化和固定化技术相结合yabo体育客户端下载,最终使胞外胞内两步催化连续进行yabo体育客户端下载,从而构建海藻糖合酶-β-淀 粉酶双酶催化的模式细胞工厂yabo体育客户端下载yabo体育客户端下载,成功实现以可溶性淀粉为廉价原料高效制备海藻糖的关键技术yabo体育客户端下载。


                      该成果以我院青年教师江凌研究员为第一作者发表在美国化学会期刊《ACS Catalysis》(2018, 8: 1837-1842)(2017年影响因子10.614)yabo体育客户端下载,论文通讯作者为南京工业大学黄和教授与上??萍即笱е映芯吭?yabo体育客户端下载。



                      作者:食品与轻工学院  审核:俞建光 



                                       

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